Determinação precoce do sexo fetal pela análise do DNA no plasma materno / Early determination of gender by analysis of fetal DNA in maternal plasma

OBJETIVO: avaliar a possibilidade do diagnóstico precoce do sexo fetal no plasma materno pela técnica da reação em cadeia da polimerase em tempo real (PCR em tempo real) a partir da 5ª semana de gestação. MÉTODOS: nesse estudo prospectivo foi coletado sangue periférico de gestantes com feto único a partir da 5ª semana de gestação. Após centrifugação do sangue, 0,4 mL de plasma foi separado para extração de DNA fetal. O DNA foi analisado em duplicata por PCR em tempo real para duas regiões genômicas (uma do cromossomo Y e outra comum a ambos os sexos) pelo método de TaqMan®, o qual utiliza um par de primers e uma sonda fluorescente. Foram excluídos da amostragem os casos que evoluíram para aborto. Para o cálculo da sensibilidade e especificidade, usamos o método de comparação com padrão-ouro, que foi o sexo ao nascimento. RESULTADOS: foram realizados 79 exames de DNA fetal no plasma materno de 52 gestantes. O resultado dos exames foi comparado com o sexo da criança após o parto. O índice de acerto conforme a idade gestacional foi de 92,6 por cento (25 de 27 casos) na 5ª semana, conferindo sensibilidade de 87 por cento e 95,6 por cento (22 de 23 casos) na 6ª semana, com sensibilidade de 92 por cento. A partir da 7ª semana de gestação o acerto foi em 100 por cento (29 de 29 casos). A especificidade foi de 100 por cento independente da idade gestacional. CONCLUSÕES: a técnica de PCR em tempo real para detecção do sexo fetal a partir da 5ª semana no plasma materno possui boa sensibilidade e excelente especificidade. Houve concordância do resultado em 100 por cento dos casos em que o diagnóstico foi masculino, independente da idade gestacional, e no caso de feminino, a partir da 7ª semana de gestação.

PURPOSE: to verify the viability of early diagnosis of fetal gender in maternal plasma by the real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) starting at the 5th week of pregnancy. METHODS: peripheral blood was collected from pregnant women with single fetus starting at the 5th week of gestation. After centrifugation, 0.4 mL plasma was separated for fetal DNA extraction. The DNA was analyzed in duplicate by real-time PCR for two genomic regions, one of the Y chromosome and the other common to both sexes, through the TaqMan® method, which uses a pair of primers and a fluorescent probe. Patients who aborted were excluded. RESULTS: a total of 79 determinations of fetal DNA in maternal plasma were performed in 52 pregnant women. The results of the determinations were compared to fetal gender after delivery. Accuracy according to gestational age was 92.6 percent (25 of 27 cases) at 5 weeks with 87 percent sensitivity, and 95.6 percent (22 of 23 cases) at 6 weeks with 92 percent sensitivity. Starting at the 7th week of pregnancy, accuracy was 100 percent (29 of 29 cases). Specificity was 100 percent regardless of gestational age. CONCLUSION: real-time PCR for the detection of fetal gender in maternal plasma starting at the 5th week of gestation has good sensitivity and excellent specificity. There was agreement of the results in 100 percent of the cases in which male gender was diagnosed, regardless of gestational age, and from the 7th week of gestation for female gender diagnosis.

Critérios para definir o número de embriões a serem transferidos em fertilização in vitro / Criteria to determine the number of embryos to be transferred in in vitro fertilization

Os autores fazem revisão sobre o impacto das técnicas de reprodução assistida na incidência de gravidez múltipla, relacionando seu impacto médico-social. Baseado na experiência pessoal no Centro de Reprodução Humana "Sinhá Junqueira" e na revisão da bibliografia atual, são feitas considerações sobre o número de embriões a serem transferidos em ciclos de FIV

Variaçäo da concentraçäo espermática entre amostras obtidas após curto intervalo de tempo / Variation in the eperm concentration between samples obtained with brief time interval

A probabilidade de gestaçao com o uso das técnicas de reproduçao assistida está ligada com o número de espermatozóides móveis (EM) recuperados após o preparo do esperma. Em geral, aceita-se como ideal no programa de inseminaçao intra-uterina a obtençao de no mínimo 5.0 milhoes de EM/ml, e no programa de fertilizaçao in vitro convencional 1.5 milhoes de EM/ml. A obtençao de uma segunda amostra é sempre aconselhada quando se supoe que esses valores nao sejam atingidos. Este estudo compara a concentraçao de EM a fresco, após a utilizaçao de idêntica técnica de capacitaçao (gradiente de Percoll) entre duas amostras de esperma colhidas de 20 pacientes com intervalo de uma a três horas. A concentraçao de EM/ ml no sêmen a fresco na primeira amostra foi de 2.92 + 2.86 milhoes versus 11.78 + 13.05 milhoes na segunda amostra (p = O.001, Wilcoxon). Por outro lado, a concentraçao de EM/ml após o processo de capacitaçao na primeira amostra foi de 2.81 + 2.36 milhoes versus 5.16 + 4.60 milhoes na segunda amostra (p = O.021, Wilcoxon). Em conclusao, o número de EM obtidos no sêmen a fresco e a pós-capacitaçao numa segunda amostra (p = O.021 Wilcoxon). Em conclusao, o número de EM obtidos no sêmen a fresco e a pós-capacitaçao numa segunda amostra foi significativamente superior ao encontrado na primeira amostra, justificando a conduta de se obter uma nova amostra, caso a primeira seja insuficiente para a utilizaçao das técnicas de reproduçao assistida.

O valor preditivo de uma única determinaçäo de ß-hCG plasmático em gestaçöes obtidas por fertilizaçäo in vitro e transferência de embriöes / The predictive value of single plasma ß-hCG determination on pregnancies achieved by in vitro fertilization and embryos transfer

Neste estudo foi testada a hipótese de que a determinaçao do beta hCG plasmático no 14a. ou 15a. dia, após a transferência embrionária num programa de fertilizaçao in vitro (FIV), pode predizer o curso da gravidez. As amostras de sangue foram obtidas de 48 pacientes que engravidaram no programa de FIV. As determinaçoes de beta-hCG foram realizadas por enzimaimunoensaio (Serozyme, Serono). Em 23 casos de gestaçoes únicas que evoluíram até o nascimento, a média dos valores plasmáticos de beta-hCG (mu = 265 ñ 153 mUI/ml) foi significativamente maior (p < 0.05, teste de Mann-Whitney) do que naquelas observadas em 12 gestaçoes simples que abortaram (mu = 149 ñ 139 mUI/ml). Por outro lado, 13 gestaçoes múltiplas que evoluíram até o nascimento mostraram uma média dos valores plasmáticos de beta-hCG (mu = 435 ñ 130 mUI/ml) significativamente superior (p < 0.O1, teste de Mann-Whitney) às obtidas na populaçao com gestaçao única. Os resultados sugerem que a determinaçao dos níveis plasmáticos de beta-hCG no 14a. ou 15a. dia após a transferência de embrioes pode predizer dentro de certos limites as populaçoes com maior risco de abortamento e de gestaçoes múltiplas.

Donation of oocytes as treatment for infertility in patients with premature ovarian failure. Awarded the "Nicolau de Moraes Barros" prize for gynecology

Um total de 7 ciclos de transferência de embriöes provenientes da doaçäo de oócitos foram realizados em 5 pacientes portadoreas de insuficiência ovariana precoce. As doadoras possuíam idade inferior a 35 anos, e as receptoras, apresentavam idade média de 38,6 anos. No esquema de sincronizaçäo entre doadora e receptora usou-se um ciclo semiprogramado com pílula, seguido de estimulaçäo da doadora com citrato de clomifeno e gonadotrofina menopausal humana. As receptoras foram facilmente acopladas com as doadoras através de um modelo flexível de doses crescentes de valerianato de estradiol. O número médio de oócitos doados foi de 3.14, a taxa de clivagem embrionária média de 80,2 por cento, sendo o número médio de embriöes transferidos de 2.57. A taxa de implantaçäo embrionária foi de 22,2 por cento. As gestaçöes clínicas ocorreram em 57,1 por cento dos ciclos. Provavelmente, essa série é a primeira apresentada na literatura nacional sobre a doaçäo de oócitos no tratamento da infertilidade em pacientes com insuficiência ovariana precoce

A ultra-sonografia endometrial como fator preditivo de gravidez num programa de fertilizaçäo in vitro / Endometrial ultrasonography as a predictor of pregnancy in an in-vitro fertilization programme

A espessura e padräo endometrial foram analisados por ultrasonografia em 100 ciclos estimulados para fertilizaçäo "in vitro" no dia da administraçäo do hormônio gonadotrófico coriônico (hCG). Em 86 ciclos empregou-se para a estimulaçäo ovariana um esquema semiprogramado com pílula + citrato de clomifene + gonadotrofina menopausal humana (hCG), e nos 14 ciclos restantes usou-se um análogo do hormônio liberador de gonadotrofinas GnRH/leupro-lide) na forma de bloqueio de longa duraçäo seguido de hMG. No dia do hCG a espessura e o padräo endometrial foram avaliados por um ultrasom Ultramark 4 (ATL) com transdutor vaginal de 5 MHz. A espessura endometrial foi significativamente inferior (p = 0.03) nos ciclos semiprogramados (8.8 ñ 2.0 mm) do que a observada no grupo com análogo do GnRH (10.2 ñ 2.0mm). A distribuiçäo dos padröes I (multicamada ou "3 linhas") e II (inteiramente homogêneo, hiperecogênico em relaçäo ao tecido miometrial) em ambos os protocolos de estimulaçäo näo foram significamente diferentes (p = 0.91). A espessura endometrial no dia do hCG no grupo com padräo I (µ1 = 8.9 ñ 2.1 mm) foi similar (p = 0.76) a observada no padräo II (µ2 = 9.0 ñ 1.9 mm). Além disso, a espessura endometrial nas pacientes que engravidaram (µg = 8.5 ñ 2.2 m) näo diferiu (p = 0.22) das näo gravidas (µng = 9.0 ñ 1.9 mm). Näo houve diferença entre a incidência de gravidez nos grupos com padräo endometrial I e II (p = 0.42). Em conclusäo, os dados deste trabalho näo evidenciaram um valor preditivo de gravidez para a análise ultrasono-gráfica da espessura e refringência endometrial no dia do uso de hCG em ciclos de FIV

Qual o número ideal de embriöes a ser transferido para o útero após fertilizaçäo in vitro? / What the number of embryos to be transferred fot the utero after in vitro fertilization

Atualmente, está bem estabelecido que a transferência de diversos embriöes após fertilizaçäo "in vitro" (FIV) leva a uma maior taxa de gravidez do que quando se transfere apenas um único embriäo. Contudo, a transferência de um número elevado de embriöes acarreta o aumento da incidência de gestaçöes múltiplas. Os objetivos deste estudo foram avaliar as repercussöes do número de embriöes transferidos sobre as taxas de gravidez e de gestaçöes múltiplas num programa de FIV. Além disso, propor um número ideal de embriöes para ser transferido ao útero discutindo-se as soluçöes alternativas para os problemas decorrentes da formaçäo de um número excessivo de embriöes. Um total de 177 ciclos de FIV realizados em 138 casais foram analisados entre janeiro de 1991 e março de 1992. A taxa de gravidez por transferência de 1(n=29), 2(n=30), 3(n=20), 4(n=41), 5(n=20) embrioes foi respectivamente de 3.4 por cento (gestaçöes : 1), 30 por cento (gestaçöes + 9), 45 por cento (gestaçöes : 9), 39 por cento (gestaçöes : 16) e 35 por cento (gestaçöes : 7). Näo houve diferença significativa na taxa de gravidez (p=0.15), quando se transferiu e ou 4 embrioes. Por outro lado, a ocorrência de gestaçöes multifetais foi a seguinte: quando foram transferidos 2 ou 3 embriöes 22.2 por cento de Gêmeos, para 4 embriöes 25 por cento de Gêmeos e 6.25 por cento de trigêmeos, sendo que com 5 embriöes obserou-se 14.28 por cento de trigêmeos. Em conclusäo, a transferência de um número maior que 3 embriöes näo acarreta a subsequente elevaçäo das taxas de gestaçöes, apenas propicia o aumento da incidência de gestaçöes multifetais. Os embriöes excedentes devem ser criopreservados para uma posterio transferência, isto até que uma adequada tecnologia para criopreservaçäo de oócitos esteja estabelecida

Taxas de clivagem embrionária após inseminaçäo de oócitos com espermatozóides capacitados no fluido folicular / Rate of cleavage after oocytes insemination with spermatozoa capacitated in follicular fluid

A finalidade este estudo foi comparar as taxas de clivagem de embriöes após inseminaçäo de oócitos com espermatozóides capacitados na presença ou näo de fluido folicular. No primeiro experimento, um total de 67 oócitos foram inseminados com espermatozóides que tiveram parte do procedimento de capacitaçäo com incubaçäo curta em fluido folicular (21 oócitos - experimento I) e espermatozóides capacitados com uso de apenas o meio de cultura Menezo B2 (46 oócitos - controle). Näo houve diferença (p=0.89) entre o número de embriöes obtidos: 13 (experimento I) e 29 (controle). No segundo experimento, um total de 49 oócitos foram inseminados com espermatozóides que tiveram todo o procedimento de capacitaçäo realizado com fluido folicular num tempo de incubaçäo longo (13 oócitos - experimento II) e espermatozóides capacitados com o uso de apenas o meio de cultura Menezo B2 (36 oócitos - controle). Näo houve diferença (p=0.31) entre o número de embriöes obtidos : 7 (experimento II) e 25 (controle). A ausência de diferenças entre as taxas declivagem nos dois experimentos informa que o fluido é um meio capaz de preparar adequadamente os espermatozóides, propiciando o fenômeno de capacitaçäo adequado. Contudo esta açäo do fluido näo é superior a observada com o uso de um meio de cultura comum com o Menezo B2

Técnicas de capacitaçäo espermática / Sperm capacitation techniques

Os autores estudaram diversas tecnicas de capacitacao espermatica: camada, sedimentacao-migracao ou swin-up, la de vidro, colunas de albumina, descontinuo gradiente de Percoll ou Nycodenz. O significado pratico do emprego destas tecnicas e discutido em relacao as caracteristicas previas das amostras de esperma.

Inseminaçäo artificial homóloga com espermatozóides capacitados no fluido folicular humano / Homologous artificial insemination with spermatozoa capacited in human follicular fluid

No presente trabalho, os autores avaliaram um novo metodode preparo do esperma atraves da migracao dos espermatozoides em fluido folicular humano. Um total de 14 pacientes com esterilidade conjugal por fator cervical, fator masculino ou esterilidade sem causa aparente foi submetido a um ciclo de inseminacao artificial homologa, com as espermatozoides sendo capacitados com o fluido folicular humano. Obteve-se uma taxa de gravidez de 14,28 por cento por ciclo de inseminacao.

Pode o tipo da inseminaçäo ser determinado pelo volume do material injetado no útero? / Can the insemination type be determined by the volume of injected material into the uterus?

Para se verificar se o tipo de inseminacao e determinado pelo volume do material injetado no utero, um grupo de 10 pacientes foram submetidas a um exame radiografico simples, logo apos a injecao na regiao fundica do utero de diferentes volumes de contrates. Os dados mostraram que volumes de 0,4 ml a 1 ml rotulariam a inseminacao como utero-tubaria, enquanto a inseminacao intra-uterina pura apenas ocorreria em volumes de 0,2 ml, e em algumas ocasioes comvolumes de 0,3 ml. Tal fato poderia explicar as variacoes dos resultados da inseminacao como metodo terapeutico em infertilidade.

Influência do pH do muco cervical no teste pós-coito / Influence of the cervical mucus pH in the postcoitus test

Estudou-se a influencia da variacao do pH nos resultados do teste pos-coito (TPC) de longa duracao quando o muco cervical e ideal (segundo os criterios de Moghissi) e o espermograma normal. A incidencia de TPC anormais e significativamente maior (p < 0,01) nos casos de pH < 7 (pH acido) em comparacao com aqueles nos quais o pH foi maior ou igual a 7. O escore de Moghissi naoinclui a medida do pH do muco endocervical. Entretanto, os dados obtidos indicamque sua medida deve ser obrigatoria para uma adequada avaliacao do TPC e um correto planejamento terapeutico.

Comparaçäo dos resultados obtidos por diferentes câmaras de contagem de espermatozóides / Comparison of the results between different sperm counting chambers

A concentracao de espermatozoides numamesma amostra de esperma foi obtida com o emprego de tres tipos de cameras de contagem: Horwell, Stroemberg-Mika e Makler. A estatistica da analise de variancia nao evidenciou diferencas significantes entre a concentracao de espermatozoides nas tres camaras, tanto em concentracoes baixas (F critico = 5,49, F obtido = 0,55) como nas altas(F critico = 5,49, F obtido = 1,65).

Gravidez após doaçäo de gametas, fertilizaçäo in vitro e transferência de embriöes para um casal com falência ovariana precoce e azoospermia: relato de um caso / Pregnancy after gametes donation, in vitro fertilization and embryos transfer in a couple with premature ovarian failure and azoospermia: repot of a case

Os autores relatam um caso de gravidez apos doacao de gametas, fertilizacao in vitro e transferencia de embrioes num casal com falencia ovariana prematura e azoospermia. Por outro lado, mostram solucoes para os problemas de sincronizacao do ciclo da receptora com o da doadora, e para o recrutamento das doadoras.

Prevençäo da síndrome de hiperestimulaçäo ovariana através dos níveis de estradiol plasmático medidos po radioimunoensaio e enzimaimunoensaio / Prevention of ovarian hyperstimuation syndrome through plama estradiol levels measured by radioimmunoassay and enzymeimmunoassay

Os autores determinaram em 38 pacientes os níveis plasmáticos de estradiol (E2) por radioimunoensaio (RIE) e enzimaimunoensaio (EIE) no momento da administraçäo de hCG exógeno. O nível limite para näo usar hCG foi de E2 2000pg/ml por RIE ou E2 2419pg/ml por EIE.1Adotando-se esse critério näo ocorreu síndrome de hiperestimulaçäo ovariana. Por outro lado, observou-se uma alta correlaçäo (r=0.93) entre os valores de E2 obtidos por RIE e EIE

Gravidez após inseminaçäo tubária indireta, com espermatozóides capacitados no fluido folicular humano / Pregnancy after indirect tubal insemination with spermatozoa capacitated in human follicular fluid

No presente trabalho, os autores relatam um caso de gravidez após inseminaçäo tubária indireta utilizando espermatozóide incubados com líquido folicular humano pela técnica de "swim-up"

Taxas de gravidez no programa ambulatorial de fertilizaçäo "in vitro" e transferência de embriöes da Maternidade Sinhá Junqueira / Pregnancy rates in the ambulatory program of fertilization in vitro and embryo transfer at the Maternidade Sinhá Junqueira

Entre dezembro de 1990 e fevereiro de 1991, um grupo de 25 casais participaram do programa ambulatiorial de FIV-TE do Centro de Reproduçäo Humana da Maternidade Sinhá junqueira. As taxas de gravidez por punçäo e por transferência de embriöes foram de 24% e 31,57% respectivamente. Esses resultados säo semelhantes ao obtidos nos melhores centros internacionais